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無水檸檬酸的生產方法共可分為3種：水果提取法，化學合成法，生物發酵法。
1.水果提取法：檸檬酸可以從檸檬、橙、橘子、蘋果等檸檬酸含量較高的水果中提取。但此法成本較高，不利于投入工業化生產。
2.化學合成法：原料有丙酮、二氯丙酮或乙烯酮。由于化學合成法工藝復雜，成本高，安全性較低，很少使用。
3.生物發酵法：包含表面發酵法、固體表面發酵法、深層發酵法、石油烴發酵法四種。而其中深層發酵周期短，產率高，節省勞動力，占地面積小，便于實現儀表控制和連續化。所以目前多以糖蜜（甜菜糖蜜、甘蔗糖蜜等），淀粉質原料（木薯、玉米等）為原料，采用黑曲霉為發酵菌種，以深層發酵的方法生產檸檬酸，產量約占80%。
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